雙縮脲試劑檢測(cè)蛋白質(zhì)原理

雙縮脲試劑本是用來(lái)檢測(cè)雙縮脲，由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此也能與銅離子在堿性溶液中發(fā)生雙縮脲反應(yīng)。當(dāng)?shù)孜镏泻须逆I時(shí)，試液中的銅與多肽配位，絡(luò)合物呈紫色。可通過(guò)比色法分析濃度，在紫外可見(jiàn)光譜中的波長(zhǎng)為540nm。鑒定反應(yīng)的靈敏度為5-160mg/mL。

雙縮脲試劑檢測(cè)蛋白質(zhì)評(píng)價(jià)

優(yōu)點(diǎn)：雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)的測(cè)定范圍是1~10mg蛋白質(zhì)，操作簡(jiǎn)單、快捷。既適合手工操作，又適合自動(dòng)化分析，重復(fù)性好、線性關(guān)系好， 雙縮脲試劑可以長(zhǎng)期保存（ 若貯存瓶中有黑色沉淀出現(xiàn)，則需要重新配制）。

缺點(diǎn)：靈敏度差，測(cè)定范圍窄，樣品需要量大，不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近，因此它常用于需要快速，但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)測(cè)定。干擾測(cè)定的物質(zhì)包括有：在性質(zhì)上是氨基酸或肽的緩沖液，如TrIs緩沖液，因?yàn)樗鼈儺a(chǎn)生陽(yáng)性呈色反應(yīng)，銅離子也容易被還原，有時(shí)出現(xiàn)紅色沉淀。